Nanocápsulas e nanoemulsões contendo antifúngicos : desenvolvimento farmacotécnico, caracterização e avaliação biológica em modelo de candidíase sistêmica.

Abstract

A freqüência de infecções sistêmicas por espécies de Candida tem aumentado nos últimos anos, principalmente, em pacientes imunossuprimidos. Os fármacos disponíveis para o tratamento são limitados, tanto pelo espectro de ação quanto pelos efeitos adversos. A associação de antifúngicos a nanovetores é uma estratégia para melhorar a eficácia e alterar a biodistribuição dos fármacos no organismo reduzindo os efeitos tóxicos. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e caracterizar nanocápsulas (NC) e nanoemulsões (NE) de fluconazol (FCZ), cetoconazol (CTZ) e miconazol (MCZ) e avaliar essas nanoestruturas em modelo de candidíase sistêmica. As NC e NE foram obtidas pelo método de nanoprecipitação (Fessi et al., 1989). A concentração de fármaco utilizada variou de 1 a 5mg/mL na suspensão coloidal. A porcentagem de encapsulação foi determinada pelo método ultrafiltração/centrifugação e o doseamento dos fármacos por espectrometria no ultravioleta. Os maiores valores de encapsulação foram obtidos com NC convencionais de PCL, sendo que os valores máximos obtidos foram de 48, 97 e 96% para o FCZ, CTZ e MCZ, respectivamente e 37% para NC furtivas de FCZ. A distribuição de tamanho das nanopartículas, determinada por espectroscopia de correlação de fótons (PCS) e por microscopia de força atômica (MFA), ficou entre 190-310nm e todas as formulações apresentaram-se monodispersas. O potencial zeta das NC e NE, determinado por microeletroforese associada à anemometria do laser doppler (ADL), variou com a adição dos fármacos, indicando, no caso do MCZ e CTZ, uma forte influência na superfície dos carreadores convencionais. Essa influência foi muito evidente no caso das NC furtivas de PLA-PEG contendo FCZ, onde valores de +2mV foram obtidos, evidenciando-se tanto uma influência do FCZ quanto das cadeias de PEG sobre a superfície. As imagens obtidas por MFA das NC e NE mostraram estruturas esféricas e bastante polidispersas em relação a determinação de tamanho feita por PCS. As NC mostraram capacidade de achatamento sobre a mica, evidenciado por MFA. A associação do MCZ às NC e NE não alterou significativamente a relação diâmetro/altura em comparação com as NC e NE vazias, enquanto a associação do FCZ aumentou essa relação. A inclusão do MCZ em altas concentrações nas NC resultou em modificação das estruturas não carregadas. O uso de glutaraldeído alterou a morfologia das nanoestruturas originais contendo MCZ. A avaliação do perfil de liberação do FCZ a partir dos carreadores foi realizado por dois métodos, diálise direta em salina e método sink externo em octanol, respectivamente. O perfil de liberação no octanol do FCZ foi semelhante para as NC e NE, sendo que a liberação foi completa em 48h. A liberação do FCZ em salina foi semelhante para o FCZ livre e para o FCZ nanoestruturado. Entretanto, diferenças significativas foram observadas na quantidade de FCZ liberado, sendo que as NC liberaram menos que as NE. Em 6h a liberação do FCZ dos sistemas foi completada em salina, devido à hidrofilia do FCZ. A avaliação da eficácia in vivo das diferentes formulações e fármacos foram realizadas em modelo de candidíase disseminada em animais imunossuprimidos com radiação gama e, posteriormente infectadas com um inóculo de Candida albicans isolado de paciente sintomático. Foram avaliados diferentes parâmetros como a sobrevida, o peso, a presença da levedura no sangue e em alguns órgãos e alterações histológicas provocadas pela infecção e pelo tratamento. O tamanho do inóculo utilizado na infecção dos animais e o tempo para início do tratamento influenciaram significativamente na sobrevida dos animais e no nível de invasão dos órgãos. Esse parâmetro foi decisivo para a distinção entre diferentes esquemas terapêuticos e formulações. Em inóculos superiores a 107 UFC a mortalidade dos animais foi de 100% com tempo médio de sobrevida (TMS) inferior a 13 dias e todos os tratamentos e doses foram ineficazes. Em inóculos inferiores a 104 UFC a sobrevida foi próxima de 100% e o TMS superior a 60 dias, mesmo em animais imunossuprimidos, independentemente do uso ou não de tratamento. Os inóculos de 105 e 106 UFC permitiram uma melhor análise entre os grupos e entre as formulações de FCZ, sendo que os dados indicam que a formulação de NC furtiva contendo FCZ foi a mais eficaz comparada ao uso do FCZ livre em termos de sobrevida. O MCZ e o CTZ não foram eficazes no tratamento deste isolado clínico de C. albicans em camundongos, nem na forma livre nem na forma encapsulada. O tratamento com NC de FCZ proporcionou uma invasão menos significativa dos órgãos, principalmente dos rins em comparação aos animais não tratados. Em conclusão, nesse trabalho foram produzidos e caracterizados, sob o ponto de vista físico-químico, nanocarreadores contendo fármacos antifúngicos azólicos. Dentre eles, o FCZ associado às NC de PLA-PEG, ditas de circulação sanguínea prolongada, foi o mais eficaz no aumento da sobrevida de animais imunossuprimidos com candidíase disseminada. Esse resultado é provavelmente atribuído à capacidade das NC furtivas de 200nm de alterar a distribuição do FCZ no organismo, devido principalmente à sua circulção sanguínea prolongada, bem como a sua capacidade de acúmulo em focos infecciosos.