Desenvolvimento e validação de métodos analíticos espectrométrico em plasma bovino para aplicação na confecção de dispositivos de liberação controlada de progesterona.
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Data
2019
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Resumo
A progesterona é um importante hormônio na reprodução de bovinos
normalmente quantificado por radioimunoensaio. A cromatografia líquida
acoplada à espectrometria de massa é uma alternativa que tem sido usada com
menor frequência, que elimina os riscos associados ao manuseio de material
radioativo. No presente estudo foi desenvolvido e validado métodos de
cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas para a determinação
dos níveis de progesterona em plasma bovino e meio aceptor (etanol: água 62,5:
37,5 v/v), com acetado de medroxiprogesterona como padrão interno. E avaliouse a cinética de liberação de P4 incorporada em PCL. As amostras foram
preparadas utilizando extração por precipitação proteica, e os extratos foram
injetados diretamente no sistema cromatográfico. A separação cromatográfica
foi realizada com pré-coluna Vanguard C18 e coluna BEH-C18 1,7µm e 100mm
de comprimento usando metanol e gradiente de solução aquosa de ácido fórmico
a 0,1% como fase móvel com taxa de fluxo de 0,3 ml / min. Utilizou-se fonte
electrospray no modo positivo. Monitoramento de reação múltipla para o íon
precursor quantificador de P4 (m / z 315) de m / z 97,0; e para IS (m / z 387,2)
de m / z 327,0. Boa linearidade foi observada ao longo das faixas de
concentração com uma regressão linear (1/x) nas duas matrizes. O método
desenvolvido para matriz plasma bovino foi comparado com resultados de
radioimunoensaio. As técnicas obtiveram alta correlação (i.e. 0,959) e não foi
detectada diferença na média dos resultados comparando as duas técnicas de
quanticação de progesterona (P <0,05). O método altamente seletivo proposto
para quantificar P4 não requer derivatização de amostras, que é uma etapa
corriqueira para a quantificação de hormônios esteróides. A cinética de liberação
da P4 em PCL foi de 1ª ordem. Portanto, foi desenvolvido um método em CLUEEM/EM/ESI sensível, seletivo e reprodutível para quantificação de P4 em duas
matrizes que é capaz de substituir o RIE. Também foi feito um piloto da liberação
de P4 em PCL que pode servir como base para futuras etapas de
desenvolvimento de dispositivos intravaginais de P4 com PCL.
Descrição
Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto.
Palavras-chave
Progesterona, Plasma sanguíneo, Espectometria
Citação
REIGOSA, Isis de Freitas. Desenvolvimento e validação de métodos analíticos espectrométrico em plasma bovino para aplicação na confecção de dispositivos de liberação controlada de progesterona. 2019. 92 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) – Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2019.