Avaliação de quimeras como candidatos vacinais em modelo hamster (Mesocricetus auratus) desafiados por Leishmania infantum.

Abstract

A leishmaniose visceral é considerada a mais grave dentre as formas clínicas das leishmanioses e até o presente momento não há uma vacina que possa ser empregada em campanhas de controle e profilaxia dessa doença. No intuito de aprimorar estratégias para o desenvolvimento de vacinas, a vacinologia reversa, por meio da imunoinformática é uma moderna tecnologia que aborda metodologias computacionais para a busca de novos alvos e candidatos vacinais. Em um estudo prévio do nosso grupo de pesquisa, duas quimeras foram desenhadas empregando a estratégia da imunoinformática, Quimera A e Quimera B, e quando associadas ao adjuvante saponina, apresentaram resultados promissores em modelo murino. Entretanto, este modelo não reflete a evolução clínica observada em cães e humanos infectados pelo parasito. Neste sentido, é fundamental avaliar estes potenciais imunobiológicos em um modelo experimental que desenvolva de forma semelhante aspectos, clínicos-patológicos, imunológicos e parasitológicos observados em cães e humanos durante a progressão da LV. Desse modo, o objetivo deste trabalho foi avaliar a imunogenicidade e eficácia das quimeras isoladas e/ou associadas ao sistema de adjuvantes saponina e monofosforil lipídeo A (MPL) em modelo hamster (M. auratus) desafiados com L. infantum. Os animais foram divididos em seis grupos experimentais compreendendo: grupo salina (SAL), sitema de adjuvantes saponina e MPL (SM), quimera A (QA), quimera A associada a saponina+MPL (QASM), quimera B (QB) e quimera B associada a saponina+MPL (QBSM). Esses animais foram imunizados com três doses de cada uma das composições vacinais em intervalos de 15 dias entre as doses. Após 21 dias da última dose, os hamsters foram desafiados com promastigotas de L. infantum em fase estacionária de crescimento, pela via intraperitoneal e após 60 dias os animais foram necropsiados. Amostras de sangue, soro, fragmentos do baço foram obtidos para a realização de diferentes análises laboratoriais através de análises hematológicas, bioquímicas, imunológicas e parasitológicas. Em relação às análises hemato-bioquímicas, observamos que os grupos imunizados apresentaram parâmetros de leucograma, eritrograma e das funções renais, hepáticas e proteinograma normais. Entretanto, foram observadas nos grupos controle (SAL) e sistema de adjuvantes (SM) queda nos valores de plaquetas e alterações nas dosagens hepáticas, principalmente de ALT. A análise da resposta humoral pelo perfil de IgG-total anti-Leishmania, evidenciou uma redução na reatividade desse anticorpo nos grupos imunizados em relação aos grupos controles. Além disso, foi evidenciado nos grupos imunizados uma elevada resposta próinflamatória de esplenócitos com aumento da produção de citocinas como IFN- e TNF-, tanto por linfócitos totais e pela subpopulação CD4+ , bem como uma redução na produção da citocina IL-10 por estas células. As vacinas demonstraram eficácia constatada pela redução do parasitismo esplênico nos grupos imunizados chegando a mais de 90% de redução da carga parasitária o que pode estar relacionado também com a alta produção de óxido nítrico (NO) encontrada nesses grupos. Dessa forma, os resultados obtidos no presente trabalho sugerem o potencial de imunogenicidade e proteção das quimeras avaliadas, a relevância da utilização do hamster como modelo experimental para LV, bem como a importância de novas estratégias como a imunoinformática para o desenvolvimento de vacinas para a LV.