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dc.contributor.advisorLana, Marta dept_BR
dc.contributor.advisorMosqueira, Vanessa Carla Furtadopt_BR
dc.contributor.authorBranquinho, Renata Tupinambá-
dc.date.accessioned2022-04-01T15:27:20Z-
dc.date.available2022-04-01T15:27:20Z-
dc.date.issued2014pt_BR
dc.identifier.citationBRANQUINHO, Renata Tupinambá. Farmacocinética e eficácia terapêutica de lactona sesquiterpênica nanoestruturada na doença de Chagas experimental em modelo murino. 2014. 166 f. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) - Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2014.pt_BR
dc.identifier.urihttp://www.repositorio.ufop.br/jspui/handle/123456789/14812-
dc.descriptionPrograma de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa de Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.pt_BR
dc.description.abstractA doença de Chagas (DCh) apesar de ser um sério problema de saúde pública na América Latina e cada vez mais constatada em países de outros continentes, ainda permanece negligenciada, pois os fármacos existentes para uso humano são ineficazes e causam graves efeitos colaterais. Os objetivos deste trabalho foram: (i) o desenvolvimento, caracterização e validação de formulações de nanocápsulas (NC) convencionais (PCL NC) e furtivas (PLA-PEG NC) contendo a lactona licnofolida (LIC) obtida de Lychnophora trichocarpha e (ii) o estudo de sua eficácia terapêutica em camundongos infectados com cepas de diferentes perfis de resistência/ susceptibilidade ao Benzonidazol e Nifurtimox (BZ e NF). O isolamento e caracterização da LIC pura foram previamente descritas por Branquinho et al. (2014 a). As NC foram produzidas para melhorar a farmacocinética da LIC, diminuir sua toxicidade, promover sua liberação controlada e melhorar sua eficácia terapêutica. As NC foram produzidas por deposição interfacial de polímero pré-formado nas concentrações de 2,0; 3,0 e 4,0 mg/mL da LIC e NC-branca. Em seguida, as LIC NC foram caracterizadas: o tamanho médio de LIC-PCL NC foi de 175,4-245,2 nm e de LIC-PLA-PEG NC de 105,2-159,2 nm. Para ambas NC e em todas as concentrações, os valores obtidos de índice de polidispersão determinados por espectroscopia de correlação de fótons foram ≤0,25. O potencial zeta determinado por anemometria por laser doppler da LIC-PCL NC foi de -42,7 a -57,1 mV e da LIC-PLA-PEG NC -30,3 a -40,1 mV. A morfologia das formulações foi determinada por microscopia de força atômica. As formulações contendo LIC foram quantificadas e validadas por CLAE-UV, conforme os requisitos estabelecidos pelo ICH, (2005). A porcentagem e eficiência de encapsulação das NC, avaliadas pela técnica de ultrafiltração/ultracentrifugação, foram de aproximadamente 100% para ambas as formulações, indicando que a LIC encontra-se associada ao núcleo oleoso da NC. Uma elevada estabilidade das formulações de LIC-PCL NC e LIC-PLA-PEG NC foi observada por um período de até seis meses. Foi desenvolvido pela primeira vez, um método bioanalítico empregando CLAE-UV, precedido de extração por precipitação de proteínas da LIC em NC contidas em amostras plasmáticas de animais tratados. O método foi validado de acordo com as especificações do FDA e ANVISA, mostrando-se adequado para ser aplicado ao monitoramento farmacocinético (PK) em modelo murino. Os principais parâmetros farmacocinéticos (pk) observados no tratamento dos camundongos com as NC foram ASC, t1/2 , Cl , TMR, . Verificou-se de maneira geral, um prolongamento da circulação plasmática, aumento da ASC e do t1/2 e uma redução do Cl da formulação LIC-PLA-PEG NC em relação à LIC-PCL NC. Os parâmetros PK da LIC livre apresentaram valores estatisticamente inferiores em relação às formulações NC. Os estudos in vivo de eficácia terapêutica foram realizados em camundongos Swiss tratados com LIC-PCL NC, LICPLA-PEG NC e BZ utilizado como fármaco de referência. O efeito de NC-LIC, LIC livre, BZ e controles foram avaliados em animais inoculados com 10.000 tripomastigotas sanguíneos (fase aguda-FA) ou 500 (fase crônicaFC) com as cepas CL, Y, Colombiana e VL-10 (estas duas últimas 100% resistente ao BZ). O tratamento foi administrado via i.v., 2,0 mg/kg/dia e oral 5,0; 8,0 e 12,0 mg/kg/dia, por 20 dias consecutivos e a eficácia terapêutica avaliada por exame de sangue a fresco, hemocultura, PCR e ELISA. Todos os protocolos revelaram atividade parcial da LIC livre e os melhores resultados terapêuticos com a formulação LIC-PLA-PEG NC em relação à LIC-PCL NC e BZ. Os animais infectados com as cepas CL, Y e Colombiana foram tratados na FA com LIC-PCL NC e LIC-PLA-PEG NC, 2,0 mg/kg/dia e BZ 50 mg/kg/dia, via i.v. Foi verificado que nos animais infectados com a cepa CL a parasitemia foi subpatente, ocorreu aumento da sobrevida e ainda 100% de cura com ambas as formulações nanoestruturadas e BZ. Em animais infectados com a cepa Y a cura foi de 62,5% com LICPCL NC, de 100% com LIC-PLA-PEG NC e de 75% com BZ. Nos animais infectados com a cepa Colombiana houve cura de 62,5% apenas com LIC-PLA-PEG NC, acompanhada de significativa redução da parasitemia e aumento da sobrevida. Nos animais infectados com a cepa Y e tratados na FA com as duas formulações de LIC NC, 5,0 mg/kg/dia e BZ 100 mg/kg/dia, via oral, foi verificado cura de 62,5% dos tratados com LIC-PLA-PEG NC e BZ e de 57,2% nos tratados com LIC-PCL NC. Nos animais infectados com a cepa Y e tratados na FC da infecção com a formulação LIC-PLA-PEG NC administrada por via i.v. e oral foram observados índices de cura de 50% e 55%, respectivamente. Este resultado foi estatisticamente superior ao observado com LIC-PCL NC que curou 33% dos animais por via i.v. e 30% por via oral, enquanto nenhum animal tratado com BZ por via i.v. e oral foi curado. Nos animais infectados com a cepa VL-10 tratados na FC com a formulação LIC-PLA-PEG NC, via oral, foi verificado cura de 87,5% dos tratados com a dose de 12,0 mg/kg/dia e de 43% dos tratados com 8,0 mg/kg/dia, enquanto os animais tratados com BZ não foram curados. Este trabalho demonstrou pioneiramente (i) a eficácia terapêutica da LIC in vivo quando livre (ii) em formulações de NC (iii), principalmente quando associada ao polímero PLA-PEG (iv), para o tratamento da DCh experimental tanto na FA (v) quanto na FC (vi) da infecção e com cepas totalmente resistentes ao BZ e NF (vii) . A formulação PLA-PEG NC alterou os parâmetros PK da LIC aumentando a sua concentração plasmática-tempo o que por consequência, aumentou sua eficácia evidenciando o grande potencial da LIC para estudos clínicos no tratamento da DCh especialmente quando associada a determinado nanocarreador.pt_BR
dc.language.isopt_BRpt_BR
dc.rightsabertopt_BR
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/us/*
dc.subjectLactonaspt_BR
dc.subjectNanotecnologiapt_BR
dc.subjectTecnologia farmacêuticapt_BR
dc.subjectFarmacocinéticapt_BR
dc.subjectQuimioterapia combinadapt_BR
dc.titleFarmacocinética e eficácia terapêutica de lactona sesquiterpênica nanoestruturada na doença de Chagas experimental em modelo murino.pt_BR
dc.typeTesept_BR
dc.rights.licenseAutorização concedida ao Repositório Institucional da UFOP pelo(a) autor(a) em 20/02/2017 com as seguintes condições: disponível sob Licença Creative Commons 4.0 que permite copiar, distribuir e transmitir o trabalho, desde que sejam citados o autor e o licenciante. Não permite o uso para fins comerciais nem a adaptação.pt_BR
dc.contributor.refereeMagalhães, Nereide Stela Santospt_BR
dc.contributor.refereeCoura, José Rodriguespt_BR
dc.contributor.refereeBahia, Maria Terezinhapt_BR
dc.contributor.refereeBarcellos, Neila Marcia Silvapt_BR
dc.description.abstractenChagas disease (DCh) is a serious public health problem in Latin America and has being frequently diagnosed in several countries of other Continents still remains neglected since the drugs existent for human use are ineffective and cause serious side effects. The objectives of this work were: (i) the development, characterization and validation of nanocapsules formulations (NC) conventional (PCL NC) and stealth (PLA-PEG NC containing lactone lychnopholide (LYC) obtained from Lychnophora trichocarpha and (ii) evaluate the therapeutic efficacy of the LYC in mice infected with strains of different profiles of resistance/susceptibility to benznidazole (BZ) and nifurtimox (NF). The isolation and characterization of pure LYC was described by Branquinho et al. (2014). The NC were produced to improve the pharmacokinetics of LYC, to reduce its toxicity and to promote controlled releasing in order to improve its therapeutic activity. The NC were produced by interfacial deposition of the preformed polymer at concentrations of 2.0; 3.0 and 4.0 mg/mL of LYC and NC-unloaded. Following, NC were characterized. The size of LYC-PCL NC was of 175.4-245.2 nm and of LYC-PLA-PEG NC was 105.2-159.2 nm and the values of size polydispersion determined by photon correlation spectroscopy of both NC in all concentrations were ≤ 0.25. The zeta potential was -42.7 mV to -57.1 for LYC-PCL NC and -30.3 to -40.1 mV for LYC-PLA-PEG NC determined by laser doppler anemometry. The morphology was evaluated by size measurement using atomic force microscopy. NC were quantified and validated by CLAE-UV, according the established by ICH (2005).The percentage of encapsulation efficacy of the NC evaluated by the technique of ultrafiltration/ultracentrifugation were of approximately of 100% for both formulations, which confirms the LYC affinity to the oil core of the NC. A high stability of the formulations LYC-PCL NC and LYC-PLA-PEG NC was observed for a period of six months. A bioanalytical method using HPLC-UV preceded of extraction by protein precipitation of LYC NC present in plasma of treated Swiss mice was developed for the first time. This method was validated according to the specifications of FDA and ANVISA and was suitable for its application in preclinical pharmacokinetic (PK) monitoring in murine model. The main PK parameters observed in the treatment of mice with NC were ASC, t1/2, Cl, TMR, . It was observed a prolongation of LYC NC circulation in the plasma, increased ASC and t1/2 and reduction of the Cl of the formulation LYC-PLA-PEG NC in relation to LYC-PCL NC. The PK parameters of free LYC showed statistically lower values when compared to the nanostructured formulations. The in vivo studies of therapeutic efficacy were done in Swiss mice treated with LYC-PCL NC, LYC-PLA-PEG NC, and BZ used as reference drug. The effect of LYC NC, LYC free, BZ and controls were studied in animals inoculated with 10.000 trypomastigotes (acute phase-AP) or 500 trypomastigotes (chronic phase-CF) of strains CL, Y, Colombian and VL-10 (the 2 last, 100% resistant to BZ). The treatment was administered i.v., 2.0 mg/kg/day and oral, 5.0, 8.0 and 12.0 mg /kg /day, for 20 consecutive days. The therapeutic efficacy was evaluated by fresh blood examination, hemoculture, PCR and ELISA. All protocols showed partial activity of free LYC and better results with LYC-PLA-PEG NC in relation to LYC-PCL NC and BZ. The animals infected with the strains CL, Y, Colombian were treated in the AP with the formulations LYC-PCL NC and LYCPLA-PEG NC, 2.0 mg/kg/day, and BZ 50 mg/kg/day, i.v. route. It was verified that in mice infected with the CL strain subpatent parasitemia, increasing (100%) of the survival and 100% of parasitological cure in animals treated with both NC formulations and BZ. In animals with the Y strain the index of cure was 62.5% with LYC-PCL NC, 100% with LYC-PLA-PEG NC and 75% with BZ. In mice infected with the Colombian strain the cure occurred only in 62.5% of the animals treated also with LYC-PLA-PEG NC, associated to significant reduction of the parasitemia and increasing of the survival. In animals infected with the strain Y and treated in the AP with the two formulations of LYC NC, 5.0 mg/kg/day and BZ 100 mg /kg/day, oral route, it was obtained 62.5% of cure in animals treated with LYC-PLA-PEG NC and BZ, and 57.2% in those treated with LYC-PCL NC. In animals infected with the Y strain treated in the CF with the formulation LYC-PLA-PEG NC administered by i.v. and oral, index of cure of 50% and 55%, respectively, were observed. These index of cure were statistically higher than the obtained with the formulation LYC-PCL NC, i.v. and oral, that cured 33% of the treated by i.v. route and 30% of treated by oral route, while no animals treated with BZ, by oral and i.v. routes, were cured. In animals infected with VL-10 strain (resistant to BZ and NF) treated in the CP of infection with the formulation LYC-PLA-PEG NC, oral route, 87.5% were cured, at dose of 12.0 mg/kg day, and 43% at dose of 8.0 mg/kg/day, while the animals treated with BZ were not cured. This study is pioneer in several aspects: the demonstration of the therapeutic efficacy of LYC in vivo (i), when free (ii) and in NC formulations (iii), mainly when associated with the PLA-PEG polymer (iv), in the treatment of experimental Chagas disease, in both, acute (v) and chronic phases of the infection (vi) with T. cruzi strains totally resistant to BZ and NF (vii). The formulation PLA-PEG NC changed the PK parameters of the LYC, increasing its plasma concentration-time, which consequently increasing of its therapeutic efficacy, and showing the great potential of this natural substance for clinical studies in the treatment of Chagas disease, especially when associated to determined nanocarrier.pt_BR
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