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Título: Estudo botânico, fitoquímico e avaliação in silico e in vitro de atividades biológicas de folhas de Humulus lupulus L. (Cannabaceae) cultivadas no Brasil.
Autor(es): Silva, Regislainy Gomes da
Orientador(es): Souza, Gustavo Henrique Bianco de
Sousa, Hildeberto Caldas de
Palavras-chave: Antioxidantes
Flavonoides
Humulus lupulus
Simulação - computadores
Data do documento: 2020
Membros da banca: Souza, Gustavo Henrique Bianco de
Costa, Fernando Batista da
Leite, João Paulo Viana
Martucci, Maria Elvira Poleti
Souza, Thiago Belarmino de
Referência: SILVA, Regislainy Gomes da. Estudo botânico, fitoquímico e avaliação in silico e in vitro de atividades biológicas de folhas de Humulus lupulus L. (Cannabaceae) cultivadas no Brasil. 2020. 192 f. Tese (Doutorado em Biotecnologia) - Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2020.
Resumo: A espécie Humulus lupulus L. (lúpulo) possui grande importância na indústria cervejeira, sendo suas flores femininas utilizadas para conferir o amargor e aroma característicos da bebida. Suas folhas são um subproduto agrícola, de potencial relevante. Devido à sua histórica utilização medicinal, é válido investigar outras possíveis aplicações biológicas. Nesse contexto, foram realizados estudos botânicos, fitoquímicos, predição de atividades biológicas e citotoxicidade de suas folhas. A coleta foi realizada em Baependi-MG e a exsicata depositada (OUPR 29768). Folhas adultas foram fixadas em FAA70 e armazenadas em etanol 70%, para os estudos botânicos. Outra parte do material foi seca, pulverizada e extraída em etanol, extrato etanólico bruto (EEB), que foi submetido a fracionamentos, obtendo-se frações hexânica (FH) e hidrometanólica (HM). A identificação das substâncias se deu por técnicas hifenadas. Foi realizada também a quantificação de fenólicos e flavonoides, bem como determinação da atividade sequestrante de radical DPPH. Os estudos in silico foram realizados através dos softwares Pass on line e Active-IT. Ao corte transversal, as folhas apresentaram mesofilo heterogêneo, com idioblastos cristalíferos contendo drusas; estômatos anomocíticos, somente na face abaxial, tricomas tectores em ambas as faces e glandulares apenas na face abaxial, sendo providos de cistólitos na epiderme adaxial. A quantificação de fenólicos e flavonoides no EEB foi 75,40 ± 8,04 mg EAG/g e 0,96 ± 0,12 mg ER/g, respectivamente; e na fração HM, os teores foram 89 ± 6,15 mg EAG/g e 7,13 ± 1,07 mg ER/g. Na avaliação do potencial antioxidante, obtevese CE50 de 105,60 µg/mL, 675,71 µg/mL e 126,72 µg/mL para o EEB, FH e HM. Através das análises por CLUE-DAD-EM/EM, foram identificados os flavonoides astragalina, nicotiflorina, caempferol-7-O-rutinosídeo, robinina, hiperina, rutina, quercetina-7-Orutinosídeo e mangaslina. EEB (800 µg/mL) e HM (1200 µg/mL) reduziram a viabilidade celular da linhagem T24 e estimularam o crescimento de MRC5 a 25 µg/mL, evidenciando a citotoxicidade seletiva. Após 24h de tratamento, não foi observada parada no ciclo celular em T24. A predição da atividade biológica dos flavonoides apresentou potenciais atividades antitumoral, citotóxica, entre outras. EEB reduziu a viabilidade das linhagens SK-mel-147 e HaCat (500 µg/mL), FH apresentou maior citotoxicidade em células tumorais, e, HM em células não tumorais.
Resumo em outra língua: Humulus lupulus L. (lúpulo), has great importance in the brewery industry and it’s the female flowers are responsible for the bitter flavor of beer. The leaves are a byproduct, with a relevant potential. Then, due to the historical importance, it’s valid to investigate its biological activities. In this project, were realized botanical, phytochemical, biological activity prediction, and cytotoxicity studies in H. lupulus leaves. The vegetal material was collected in Baependi-MG and the exsiccate deposited (OUPR 29768). Fully expanded leaves were fixed at FAA70, and preserved on ethanol 70%, aiming botanical studies. Another part of the collected material was dried and pulverized and then subjected to extractions using ethanol, crude ethanolic extract (EB), that was fractionated in hexanic (SH) and hydromethanolic (SEM) fractions. The identification of metabolite classes was made by hyphenated techniques. The quantification of phenolic compounds and flavonoids were made, and the determination of antioxidant capacity, by the DPPH assay. The in silico predictions were realized by the software Pass online and Active-IT. The leaf lamina is dorsiventral, with idioblast containing druse; stomata are anomocitic, on abaxial epidermis tectors trichomes on both sides and glandular trichomes on abaxial face and cistolites on adaxial face. The phenolic compounds and flavonoids contents on EB was 75.40 ± 8.04 mgEGA and 0.96 ± 0.12 mgEqR, respectively and on SEM was 89 ± 6.15 mg EqGA and 7.13 ± 1.07 mg EqR. On DPPH assay, CE50 were 105.60 µg/mL, 675.71 µg/mL and 126.72 µg/mL to EB, SH and SEM respectively. The flavonoids identified by UPLC-DAD-MS/MS were astragalin, nicotiflorin, kaempferol-7-O-rutinoside, robinin, hyperin, rutin, quercetin-7- O-rutinoside and manghaslin. EB (800 µg/mL) and SEM (1200 µg/mL) reduce T24 cell viability and stimulate MRC5 growth at 25 µg/mL, evidencing a selective cytotoxicity. After 24h, was not observed cycle arrest of T24 cells. The bioactivity prediction indicated potential activity as antitumoral, cytotoxic, and others. EEB reduces SK-mel147 and HaCat Cell viability (500 µg/mL), FH was more citotoxic to tumoral cells and SEM, on non-tumoral cells.
Descrição: Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa de Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.
URI: http://www.repositorio.ufop.br/handle/123456789/13068
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