Avaliação do estresse oxidativo e defesas antioxidantes na doença hepática induzida pelo Mayaro virus (Togaviridae) em camundongos BALB/c e construção/caracterização de um clone infeccioso para estudo da patogênese.

Abstract

O Mayaro virus (MAYV) é um arbovírus, membro da família Togaviridae e gênero Alphavirus. A infecção em humanos causa uma síndrome febril (Febre Mayaro) seguida por um quadro persistente de artrite/artralgia. Não existem tratamento e vacina disponíveis contra a infecção. Ainda, os mecanismos moleculares que contribuem para a patogênese viral não são completamente compreendidos. Estudos têm sido feitos na tentativa de elucidar fatores envolvidos na patogênese do MAYV com intuito de encontrar estratégias de controle e/ou prevenção da doença. Recentemente, nosso grupo de pesquisa mostrou que a infecção in vitro pelo MAYV gera um desequilíbrio na homeostase redox celular e consequente estresse oxidativo, o que pode contribuir para a patogênese viral. O estresse oxidativo é uma condição que resulta da interrupção e/ou desregulação da sinalização e controle redox, que pode ser causada pelo aumento de Espécies Reativas de Oxigênio (ERO) e/ou por uma redução no sistema de defesa antioxidante. Aqui, nós avaliamos o estresse oxidativo na doença hepática causada pelo MAYV em modelo animal a fim de verificar se essa condição também ocorre após a infecção in vivo. Para tal, camundongos BALB/c (3-4 semanas) foram infectados com o MAYV e sinais clínicos da doença foram monitorados. Adicionalmente, foi verificado se o fígado atua como um local de multiplicação viral e se a infecção leva a alterações histopatológicas e um desequilíbrio na homeostase redox. O fígado foi escolhido como órgão alvo já que é considerado um importante local de multiplicação para os alfavírus, facilitando a proliferação viral no organismo infectado, além ser um importante órgão relacionado a processos inflamatórios e redox. Como resultado, a infecção de camundongos BALB/c com MAYV causou doença auto-resolutiva, com redução significativa de ganho de peso, viremia, produção de anticorpos neutralizantes e alteração das transaminases hepáticas. Partículas infecciosas foram isoladas no fígado dos animais e um aumento no número de células inflamatórias foi observado no fígado dos animais infectados após análise histológica. A infecção aumentou os níveis de biomarcadores de estresse oxidativo e alterou a atividade de enzimas antioxidantes, reforçando a hipótese que o estresse oxidativo pode contribuir para a patogênese viral. Coletivamente, esses resultados garantem estudos futuros que visam estratégias alternativas para o tratamento da febre Mayaro baseada em compostos antioxidantes. Outra abordagem feita foi a construção de um clone infeccioso do MAYV para estudo futuro de fatores genéticos relacionados ao vírus que possam ajudar a entender a interação vírushospedeiro e elucidar aspectos moleculares associados à sua patogênese, mais especificamente da artrite. Para tal, o clone infeccioso foi construído a partir de uma amostra do MAYV, contendo dois fragmentos do genoma viral completo, que foram clonados no vetor 181/25 originado da vacina livre-atenuada do Chikungunya virus (CHIKV). Após a construção do plasmídeo, o clone de cDNA foi transcrito e o RNA viral eletroporado em células BHK-21. Altos títulos virais foram observados, demonstrando que ambos (MAYV isolado selvagem e clone infeccioso) podem multiplicar eficientemente e infectar células. Assim, o clone infeccioso do MAYV produzido permitirá o estudo dos aspectos da replicação viral e servirá de base para o desenvolvimento de um sistema de genética reversa que auxiliará em futuros estudos de patogênese da artrite, assim como vacinas e antivirais contra o MAYV.