Emprego da vacinologia reversa para a identificação, triagem e avaliação de peptídeos de L. infantum para o desenho e desenvolvimento de vacinas poliepítopos e de coquetel de peptídeos contra a leishmaniose visceral.

Abstract

No contexto de desenvolvimento de vacinas, a vacinologia reversa, ou imunoinformática, é uma abordagem que integra diferentes metodologias computacionais para a busca de alvos e o desenho de vacinas. Assim, a imunoinformática vem se destacando ao permitir o uso de programas para a predição de epítopos imunogênicos in silico. Essa estratégia tem o potencial de buscar alvos para o desenvolvimento de vacinas em todo o proteoma predito de organismos patogênicos. Até a presente data, não existe uma vacina eficaz contra a leishmaniose visceral empregada em campanhas de vacinação. Diante desse cenário, este projeto propõe a utilização da imunoinformática para selecionar epítopos e construir vacinas quiméricas poliepítopos e/ou coquetel de peptídeos a serem testadas contra leishmaniose visceral. No capítulo II desta tese foi apresentado um sistema de predição de epítopos de células T e B, além de vias de sinalização de proteínas. Este sistema foi validado utilizando dados experimentais de proteínas imunogênicas já descritas na literatura, comprovando a existência de uma correlação e associação entre o número de epítopos preditos para células T/B e os resultados experimentais relatados. Em seguida, no capítulo III encontram-se os dados relacionados a duas quimeras poliepítopos que foram desenhadas a partir da abordagem proposta em proteínas imunogênicas já escritas na literatura. Tais quimeras formuladas deram origem a duas vacinas, VAC-1 (quimera A) e VAC-2 (quimera B) ambas associadas ao adjuvante saponina. Assim, foi avaliada a imunogenicidade, a geração de memória imunológica e eficácia das vacinas em camundongos BALB/c submetidos ao protocolo de imunização e desafio com promastigotas de Leishmania infantum. Essas vacinas apresentaram imunogenicidade e capacidade para induzir linfócitos T de memória além de promoverem redução da carga parasitária no baço. Finalmente, no capítulo IV, são mostrados os resultados obtidos de peptídeos imunogênicos identificados através da abordagem de imunoinformática no proteoma predito de L. infantum. Para a seleção destes peptídeos foi realizada uma triagem em cães naturalmente infectados por L. infantum. Estes testes permitiram selecionar os peptídeos que obtiveram melhor performance após o inóculo intradérmico. Assim, foram constituídas as vacinas VAC-3 (coquetel 1) e VAC-4 (coquetel 2) ambas associadas à saponina que foram avaliadas em relação a imunogenicidade, a ativação de células T de memória e a eficácia frente ao desafio com L. infantum. Os resultados obtidos demostraram que a VAC-3 apresentou-se promissora no que se refere a imunogenicidade, indução de memória imunológica de células T e diminuição da carga parasitária no tecido esplênico. Este estudo permitiu certificar e ratificar o potencial da imunoinformática como ferramenta a ser empregada no desenvolvimento de vacinas contra a leishmaniose visceral. Assim sendo, torna-se relevante a realização de maiores estudos para comprovar a real eficácia das vacinas propostas em cães.